高效毛细管电泳色谱仪分析的样品预浓缩方法

2016042711:11:34来源:中国振动机械网

高效毛细管电泳色谱仪（CE）分析的样品预浓缩方法有堆积进样、电场聚焦进样、等速电泳进样、固相萃取、液液分配色谱、中空纤维液相微萃取、吸附色谱和亲和色谱等。一、堆积进样：1、原理：根据样品塞子与CE缓冲液的导电性差异来实现。若样品的导电性小于CE缓冲液，样品塞子上的电场强度高于缓冲液，样品塞子中离子的迁移速度大于缓冲液。若样品以夹心饼干方式进行CE电泳，则样品在缓冲液中聚焦浓缩。2、特点：可显著增加样品的输出信号，约达20倍。二、电场聚焦进样：1、原理：电场聚焦进样类似于样品堆积进样，也是根据样品与CE缓冲液的迁移速度差异来实现，差别是进样步骤和聚焦过程。电场聚焦进样是在整个进样过程都施加电压，聚焦发生在用缓冲液瓶更换为样品瓶直到CE电泳开始的一段时间。即电场聚焦进样是根据样品的迁移速度与电场强度成正比的特点，在CE电泳初期，使样品从高电场突然转入低电场，因减速而堆积在电场交界处，使区带变窄，浓度提高，而达到聚焦浓缩的目的。2、特点：可突破样品堆积进样70%毛细管体积的进样量限制，使样品浓缩约100倍，但有进样歧视现象。三、等速电泳进样：等速电泳进样既是CE的一种电泳模式，又可作为预浓缩的一种方法。采用等速电泳进样进行样品预浓缩有耦合毛细管等速进样和瞬时毛细管等速进样两种模式。1、耦合毛细管等速进样：（1）原理：将两根毛细管相连接，一根用作等速电泳（ITp），另一根用作CE电泳。（2）特点：仅适用于水溶性样品且装置复杂，不常用。2、瞬时毛细管等速进样：（1）原理：用一根毛细管既作ITp电泳，又作CE电泳。首先步，将样品溶解在前导电解质（通常是氨溶液）中，以压力进样方式将样品导入CE毛细管中。然后将毛细管插入尾随电解质瓶（通常为醋酸）中，在毛细管两端施加约30kV电压北京离婚咨询，使前导电解质、样品和尾随电解质向阴极移动，由于淌度差异，样品被聚焦在前导电解质和和尾随电解质之间。第二步，用前导电解质作为背景电解质进行CE电泳。（2）特点：对蛋白质和多肽均可进行分析，极具发展前景。四、固相萃取：1、原理：固相萃取常用C2、C8和C18作吸附剂，萃取床连接在转移毛细管和CE之间。样品通过转移毛细管进入萃取床，用电泳缓冲液冲洗样品，随后注入50～100nL有机修饰剂塞子使样品洗脱进入CE。有机修饰剂可引起样品堆积。2、特点：可显著降低检测下限，但会使分离度降低，谱带展宽，峰拖尾。五、液液分配色谱：1、根据液液分配色谱和电泳进行浓缩：（1）步骤：首先步，将样品溶解在非极性溶剂（如乙酸乙酯）中，以电动进样方式将样品导入CE毛细管中。同时，由于液体对流作用，可避免大量乙酸乙酯进入毛细管中。第二步，将毛细管插入尾随电解质瓶中，在电场作用下开始聚焦。第三步，达到稳态后，将毛细管插入前导电解质瓶中进行CE电泳。（2）特点：此法浓缩能力高达1000倍，但蛋白质易变性，在非极性相中易沉淀。2、用一张浸有非极性溶剂（如十一碳烷）的聚丙烯膜将预浓缩室隔成两个部分：一部分是供相，作为样品进入相；另一部分是受相，作为富集相。两相均为水溶性。通过调节两相pH，使样品在供相中不带电荷，进入受相则带电荷，从而达到浓缩目的。六、中空纤维液相微萃取：1、原理：利用中空纤维壁能选择性阻止一定分子量的物质通过的特性而达到浓缩目的。将中空纤维通过Teflon管与CE毛细管相连接，以电动方式进样，由于蛋白质不能透过中空纤维壁而聚集在毛细管入口端。浓缩完成后，关闭进样电场，接通分离电场进行CE电泳。2、特点：此法速度快，浓缩效率高，可除掉一些小分子物质（如盐类）离婚官司律师费，对痕量蛋白质的检测十分有效。七、吸附色谱：1、原理：在CE毛细管进样端填充一小段吸附色谱填料或涂布一层色谱固定液，使样品吸附浓集，再进行CE电泳。2、特点：此法可提高检测灵敏度近百倍，但进样时间长。八、亲和色谱：1、原理：将亲和色谱柱与CE毛细管相连接，以压力方式进样，然后根据样品性质，以小体积的有机溶剂或特殊缓冲液进行洗脱，进入CE。2、特点：此法进样量可达50mu;L，浓缩高达100～500倍，可有效地降低检测下限。